产品货号：
BTN81212B
中文名称：
一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(中pH)
英文名称：
One-Stop Protein Native PAGE Pack(B)
产品规格：
30次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native PAGE)是目前电泳法分离活性蛋白的主要方法之一，跟SDS-PAGE根据分子量大小分离蛋白质不同，它是根据蛋白质分子大小、形状、电荷密度三个主要参数分离蛋白质。由于蛋白质的pI各不相同，所以对不同蛋白质需要选用具有不同pH的电泳体系。单独配制不同pH的Native PAGE电泳胶十分繁琐，为此本公司开发了本制品。
产品特点：
1．即开即用，不需单独准备各种成分，十分方便。还免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺
2．非变性，电泳过程中蛋白质保持天然的构象和亚基之间的相互作用，得到的蛋白质一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白没有活性)。
3．可用于分析蛋白质和DNA或RNA的相互作用、蛋白修饰、蛋白构型改变、回收有活性蛋白质等试验。
4．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
5．提供具有3种不同pH的缓冲液套装，便于客户选择最适合的缓冲液体系。
产品组成：
注：高、中和低pH缓冲液套装里面均含100mL浓缩胶配胶液、200mL分离胶配胶液、10L电泳液(干粉)和1mL上样液，只是pH不同。
储存条件：常温运输和保存(上样液需-20℃保存)，保存期为一年。
使用方法：
如何选择缓冲液?
高pH浓缩胶，高pH分离胶，高pH电泳液和高pH上样液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此，绝不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。选择适当pH的缓冲液(包括上样液，电泳液，配胶液等)对蛋白质非变性PAGE非常重要，缓冲液的最佳pH又跟目的蛋白质的pI值密切相关。如果pH远离pI，则蛋白质分子带电多(电荷密度大)，电泳速度快，分辨率高。但过酸过碱又容易使蛋白质结构变性，失去活性，所以最佳pH条件就是在电泳分辨率和维持活性之间寻找平衡，需要针对每种蛋白质进行摸索或通过滴定曲线来确定，没有通用的电泳缓冲体系。由于有近半数的蛋白质pI在4-6.5，所以在不知道目标蛋白的pI时，可以先选用高pH缓冲系统。
一、配制分离胶
1．确定浓度。对分子量在100Kd以上的蛋白质，可选用3～5%的胶；对分子量在20～150KD之间的蛋白质，可选用5～10%的胶；对分子量在10～80KD之间的蛋白质，可选用10～15%的胶。对未知样品，建议使用7.5%的胶。
2．配制10%的APS(过硫酸铵)：按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL去离子水的比例配制10%的APS溶液，该溶液可以在4℃存放一周。
3．配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19:1)溶液:在本制品提供的装有60克丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和3g甲叉双丙烯酰胺，充分摇晃直到溶解(约需10～20分钟)即得200mL 30%丙烯酰胺(19:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完，必须4℃避光保存。
4．配10mL分离胶(如果配制其他体积，请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入4.2mL去离子水、3.3mL 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×分离胶配胶液。
5．摇晃混匀后抽真空10～15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙烯酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。注意：如果购买的是低pH缓冲系统，由于在低pH缓冲液中PAGE聚合速度降低，所以需要增加上述两成分的用量。
7．在胶面距离顶部1-1.5cm的时候停止灌胶。然后覆盖一层1～5mm厚的水，使胶顶部液面平整。由于比重不同，水和丙烯酰胺溶液不会混合。
8．室温聚合30～60分钟后，用1×分离胶配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。
二、配制浓缩胶(浓缩胶可以提高分辨率，适合于成分复杂的样品，一般使用浓度为4%。使用浓缩胶时蛋白质泳动速度主要跟其尺寸和形状相关。因浓缩胶pH跟分离胶pH不同，蛋白质可能会发生聚合和沉淀。对成分单一的样品，可以不用浓缩胶，此时蛋白的泳动速度主要跟其电荷密度，尺寸和形状相关。)
1．配10mL浓缩胶(如果配制其他体积，请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入6.2mL去离子水、1.3mL 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×浓缩配胶液。
2．摇晃混匀后抽真空10～15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应)。
3．按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀后在已经凝固的分离胶上倒胶。
4．在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
5．室温聚合30～60分钟，拔出梳子，用1×电泳液冲洗加样孔。
三、电泳
1．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够1×电泳液。注：本制品提供10升的三种不同pH的电泳液干粉中的一种，低PH和高PH值电泳液用前需将所有干粉溶解在1L水中得10×电泳液，可以室温放置，用时再稀释成1×电泳液。一般不需要再调节pH，但保险起见，可以用pH试纸测试一下1×电泳液。高中低pH电泳缓冲液的pH分别是8.3，7.0和4.5。
注意：中pH值的电泳液干粉只能配1x电泳液，否则不溶解。称取中pH电泳液(pH7.0)干粉A，5.52g，中pH电泳液(pH7.0)干粉B 1g混匀，加去离子水至彻底溶解，调PH7.0，定容至1L。客户根据可实际需要量按比例增减。
2．连接电极。如果浓缩胶和分离胶的pH高于目标蛋白pI，目标蛋白将带负电荷并向阳极移动，可以按标准的SDS-PAGE方法接通电极(上阴极下阳极)；如果浓缩胶和分离胶pH低于目标蛋白pI，目标蛋白将带正电荷并向阴级移动，此时应该下阴极上阳极。
3．300V预电泳直到电流不再降低(约需要30分钟)以去除残留过硫酸铵。
4．换电泳液。
5．在液体蛋白质样品中加入5×上样液(16μL液体样品加4μL上样液)后上样。0.75mm厚的胶可以上10μL，1.5mm厚的胶可以上20μL。在未用加样孔中也要加1×上样液以防有样品的空道的样品扩散。注意：如果用考染检测，每个孔的蛋白最好在50～100μg总蛋白，如果银染则只需要1μg即可。样品如果是蛋白质沉淀，可用1×上样液直接溶解蛋白质沉淀后再上样。蛋白质溶液或沉淀中不能含有能够改变上样液pH的残留成分(如蛋白质沉淀剂TCA)，用前最好用pH试纸测试一下，不在上样液的pH范围时就用酸或碱调到正常范围。大量样品可用透析法调pH。
6．上样自备的天然PAGE蛋白质标准或等电电泳的标准品(如果有的话)。
7．用15 mA(对0.75mm厚的胶)或30mM(对1.5mm厚的胶)的电流电泳直到染料移动到分离胶底部。微型胶一般需要1～2小时。注意：电泳过程最好在冷室或有冷却系统，以免电泳产热使蛋白质变性。
8．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或酶活性检测)。
相关搜索：一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(中pH)，One-Stop Protein Native PAGE Pack(B)
产品特点：
1．即开即用，不需单独准备各种成分，十分方便。还免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺
2．非变性，电泳过程中蛋白质保持天然的构象和亚基之间的相互作用，得到的蛋白质一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白没有活性)。
3．可用于分析蛋白质和DNA或RNA的相互作用、蛋白修饰、蛋白构型改变、回收有活性蛋白质等试验。
4．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
5．提供具有3种不同pH的缓冲液套装，便于客户选择最适合的缓冲液体系。
产品组成：
| 成分 | 规格 |
| 丙烯酰胺干粉 | 60g |
| 甲叉双丙烯酰胺干粉 | 3g |
| TEMED | 1.5mL |
| 过硫酸铵干粉 | 1g |
| 高中低缓冲液套装选一 | ABC之一(见下) |
| 说明书 | 1份 |
| 高pH缓冲液套装(只有BTN81212A有此成分) | |
| 高pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4× | 100mL |
| 高pH分离胶配胶液(pH8.9)，4× | 200mL |
| 高pH电泳液(pH8.3) | 10L(干粉) |
| 高pH上样液，5× | 1mL |
| 中pH缓冲液套装(只有BTN81212B有此成分) | |
| 中pH浓缩胶配胶液(pH5.5)，4× | 100mL |
| 中pH分离胶配胶液(pH7.5)，4× | 200mL |
| 中pH电泳液(pH7.0)干粉A | 55.2g |
| 中pH电泳液(pH7.0)干粉B | 10g |
| 中pH上样液，5× | 1mL |
| 低pH缓冲液套装(只有BTN81212C有此成分) | |
| 低pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4× | 100mL |
| 低pH分离胶配胶液(pH4.3)，4× | 200mL |
| 低pH电泳液(pH4.5) | 10L(干粉) |
| 低pH上样液，5× | 1mL |
注：高、中和低pH缓冲液套装里面均含100mL浓缩胶配胶液、200mL分离胶配胶液、10L电泳液(干粉)和1mL上样液，只是pH不同。
储存条件：常温运输和保存(上样液需-20℃保存)，保存期为一年。
使用方法：
如何选择缓冲液?
高pH浓缩胶，高pH分离胶，高pH电泳液和高pH上样液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此，绝不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。选择适当pH的缓冲液(包括上样液，电泳液，配胶液等)对蛋白质非变性PAGE非常重要，缓冲液的最佳pH又跟目的蛋白质的pI值密切相关。如果pH远离pI，则蛋白质分子带电多(电荷密度大)，电泳速度快，分辨率高。但过酸过碱又容易使蛋白质结构变性，失去活性，所以最佳pH条件就是在电泳分辨率和维持活性之间寻找平衡，需要针对每种蛋白质进行摸索或通过滴定曲线来确定，没有通用的电泳缓冲体系。由于有近半数的蛋白质pI在4-6.5，所以在不知道目标蛋白的pI时，可以先选用高pH缓冲系统。
一、配制分离胶
1．确定浓度。对分子量在100Kd以上的蛋白质，可选用3～5%的胶；对分子量在20～150KD之间的蛋白质，可选用5～10%的胶；对分子量在10～80KD之间的蛋白质，可选用10～15%的胶。对未知样品，建议使用7.5%的胶。
2．配制10%的APS(过硫酸铵)：按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL去离子水的比例配制10%的APS溶液，该溶液可以在4℃存放一周。
3．配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19:1)溶液:在本制品提供的装有60克丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和3g甲叉双丙烯酰胺，充分摇晃直到溶解(约需10～20分钟)即得200mL 30%丙烯酰胺(19:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完，必须4℃避光保存。
4．配10mL分离胶(如果配制其他体积，请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入4.2mL去离子水、3.3mL 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×分离胶配胶液。
5．摇晃混匀后抽真空10～15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙烯酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。注意：如果购买的是低pH缓冲系统，由于在低pH缓冲液中PAGE聚合速度降低，所以需要增加上述两成分的用量。
7．在胶面距离顶部1-1.5cm的时候停止灌胶。然后覆盖一层1～5mm厚的水，使胶顶部液面平整。由于比重不同，水和丙烯酰胺溶液不会混合。
8．室温聚合30～60分钟后，用1×分离胶配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。
二、配制浓缩胶(浓缩胶可以提高分辨率，适合于成分复杂的样品，一般使用浓度为4%。使用浓缩胶时蛋白质泳动速度主要跟其尺寸和形状相关。因浓缩胶pH跟分离胶pH不同，蛋白质可能会发生聚合和沉淀。对成分单一的样品，可以不用浓缩胶，此时蛋白的泳动速度主要跟其电荷密度，尺寸和形状相关。)
1．配10mL浓缩胶(如果配制其他体积，请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入6.2mL去离子水、1.3mL 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×浓缩配胶液。
2．摇晃混匀后抽真空10～15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应)。
3．按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀后在已经凝固的分离胶上倒胶。
4．在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
5．室温聚合30～60分钟，拔出梳子，用1×电泳液冲洗加样孔。
三、电泳
1．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够1×电泳液。注：本制品提供10升的三种不同pH的电泳液干粉中的一种，低PH和高PH值电泳液用前需将所有干粉溶解在1L水中得10×电泳液，可以室温放置，用时再稀释成1×电泳液。一般不需要再调节pH，但保险起见，可以用pH试纸测试一下1×电泳液。高中低pH电泳缓冲液的pH分别是8.3，7.0和4.5。
注意：中pH值的电泳液干粉只能配1x电泳液，否则不溶解。称取中pH电泳液(pH7.0)干粉A，5.52g，中pH电泳液(pH7.0)干粉B 1g混匀，加去离子水至彻底溶解，调PH7.0，定容至1L。客户根据可实际需要量按比例增减。
2．连接电极。如果浓缩胶和分离胶的pH高于目标蛋白pI，目标蛋白将带负电荷并向阳极移动，可以按标准的SDS-PAGE方法接通电极(上阴极下阳极)；如果浓缩胶和分离胶pH低于目标蛋白pI，目标蛋白将带正电荷并向阴级移动，此时应该下阴极上阳极。
3．300V预电泳直到电流不再降低(约需要30分钟)以去除残留过硫酸铵。
4．换电泳液。
5．在液体蛋白质样品中加入5×上样液(16μL液体样品加4μL上样液)后上样。0.75mm厚的胶可以上10μL，1.5mm厚的胶可以上20μL。在未用加样孔中也要加1×上样液以防有样品的空道的样品扩散。注意：如果用考染检测，每个孔的蛋白最好在50～100μg总蛋白，如果银染则只需要1μg即可。样品如果是蛋白质沉淀，可用1×上样液直接溶解蛋白质沉淀后再上样。蛋白质溶液或沉淀中不能含有能够改变上样液pH的残留成分(如蛋白质沉淀剂TCA)，用前最好用pH试纸测试一下，不在上样液的pH范围时就用酸或碱调到正常范围。大量样品可用透析法调pH。
6．上样自备的天然PAGE蛋白质标准或等电电泳的标准品(如果有的话)。
7．用15 mA(对0.75mm厚的胶)或30mM(对1.5mm厚的胶)的电流电泳直到染料移动到分离胶底部。微型胶一般需要1～2小时。注意：电泳过程最好在冷室或有冷却系统，以免电泳产热使蛋白质变性。
8．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或酶活性检测)。
相关搜索：一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(中pH)，One-Stop Protein Native PAGE Pack(B)